La RT-qPCR en deux étapes dissocie la synthèse d’ADNc et la qPCR, ce qui vous offre une plus grande liberté dans le choix de la transcriptase inverse (RT) et des réactifs qPCR. Une telle flexibilité peut être utile pour contrôler la représentation des séquences, optimiser l’efficacité et améliorer les réactions RT-qPCR difficiles ou réalisées sur de faibles quantités d’ARN.
Dernière nouveauté de la gamme Luna qPCR/RT-qPCR, LunaScript RT SuperMix Kit est optimisé pour la synthèse du premier brin d’ADNc dans les RT-qPCR en deux étapes. Ce kit offre des performances exceptionnelles, des protocoles simples et un colorant bleu pratique pour suivre l’ajout du réactif à vos échantillons.
Les ADNc synthétisés par LunaScript ont fait l’objet d’une évaluation approfondie à l’aide des master mix Luna® pour qPCR. L’utilisation combinée de ces produits permet de réaliser des RT-qPCR en deux étapes avec une excellente sensibilité, pour des quantifications précises et linéaires.
- Préparation simplifiée des réactions grâce à un format supermix pratique
- Élimination des erreurs de pipetage grâce à un colorant visible inerte
- Synthèse d’ADNc en moins de 15 minutes
- Performances optimales – Tous les produits Luna ont été soumis à des tests rigoureux pour assurer une spécificité, une sensibilité, une précision et une reproductibilité maximales
- Linéarité, sensibilité et capacité uniformes pour une quantification fiable de l’ARN à chaque expérience
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Des RT-qPCR robustes avec LunaScript et les master mix Luna pour qPCR
LunaScript RT SuperMix Kit présente le protocole de synthèse du premier brin d’ADNc le plus rapide du marché
Comparaison de protocoles recommandés pour la synthèse d’ADNc. LunaScript RT SuperMix Kit nécessite le temps de réaction le plus court et résiste à des températures élevées, ce qui minimise les problèmes liés à la structure secondaire de l’ARN.
LunaScript RT SuperMix Kit offre une sensibilité, une linéarité et une reproductibilité exceptionnelles dans les RT-qPCR en deux étapes
Des ARN ont été rétrotranscrits en ADNc à l’aide de 1X LunaScript RT SuperMix dans des réactions de 20 μl, dans des conditions standards (25 °C/2 min, 55 °C/10 min, 95 °C/1 min). L’ADNc a ensuite été quantifié par qPCR avec Luna Universal qPCR Master Mix (NEB réf. M3003) et 1 μl d’ADNc comme matrice, en triplicat pour chaque concentration d’échantillon initial. A. Des ARN totaux de cellules Jurkat (dilutions en série de 1 μg à 1 pg) ont été rétrotranscrits en ADNc, qui a ensuite été quantifié par qPCR avec la séquence de la β-actine comme cible. B. ERCC (External RNA Controls Consortium) Mix 1 – contenant 5 × 109 à 50 copies d’ERCC00130 (~10 ng à 10 fg) – a été rétrotranscrit en ADNc, qui a ensuite été quantifié par qPCR.
LunaScript RT SuperMix Kit offre une meilleure détection linéaire des ARN cibles
Des supermix de transcription inverse ont été utilisés selon les recommandations de leurs fabricants respectifs pour synthétiser de l’ADNc à partir de 1 μg – 100 pg d’ARN totaux humains (cellules Jurkat). Les produits ont ensuite été quantifiés par qPCR avec huit cibles d’abondance, de longueur et de taux de GC différents. Les réactions de qPCR ont été réalisées avec Luna Universal qPCR Master Mix (NEB réf. M3003) ou Luna Universal Probe qPCR Master Mix (NEB réf. M3004). Les résultats ont été évalués en termes d’efficacité et de ΔCq, qui mesure la détection à faible concentration et l’absence d’amplification du contrôle sans matrice (NTC) (ΔCq = Cq moyen du NTC – Cq moyen de la concentration la plus faible). Les critères de performance cibles (efficacité = 90-110 %, ΔCq ≥ 3) sont encadrés en vert.
Liste des produits disponibles
| PRODUIT | REF. | COND. | PRIX | PLUS D’INFOS |
|---|---|---|---|---|
| NOUVEAU LunaScript® RT Master Mix Kit (Primer-free) | E3025S/L | 25/100 rxns |  |
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| NOUVEAU Luna SARS-CoV-2 RT-qPCR Multiplex Assay | E3019S/L | 96/480 rxns | |
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| NOUVEAU Luna Probe One-Step RT-qPCR 4x Mix with UDG | M3019S/L/X/E | 200/500/1000/2000 rxns | |
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| Luna Cell Ready One-Step RT-qPCR Kit | E3030S | 100 rxns | |
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| Luna Cell Ready Probe One-Step RT-qPCR Kit | E3031S | 100 rxns | |
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| Luna Cell Ready Lysis Module | E3032S | 100 rxns | |
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| Luna Universal qPCR Master Mix | M3003S | 200 rxns (2x1ml) |  |
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| M3003L | 500 rxns (5x1ml) | |
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| M3003X | 1000 rxns (10x1ml) | |
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| M3003E | 2500 rxns (1x25ml) | |
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| Luna Universal Probe qPCR Master Mix | M3004S | 200 rxns (2x1ml) | |
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| M3004L | 500 rxns (5x1ml) | |
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| M3004X | 1000 rxns (10x1ml) | |
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| M3004E | 2500 rxns (1x25ml) | |
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| Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit | E3005S/L/X/E | 200/500/1000/2500 rxns | |
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| Luna Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit | E3006S/L/X/E | 200/500/100/2500 rxns | |
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| LunaScript RT SuperMix Kit | E3010S/L | 25/100 rxns | |
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| E3010L | 100 rxns | |
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Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com
