Kit Monarch Total RNA Miniprep

La purification d’ARN devient un jeu d’enfant :
Monarch® RNA Purification Kit , un kit « universel » pour une purification rapide et facile des ARN totaux à partir des cellules, tissus, sang, bactéries, plantes…

Monarch Total RNA Miniprep Kit est une solution complète pour la préservation des échantillons, la lyse cellulaire, l’élimination de l’ADNg et la purification des ARN totaux à partir d’un large éventail d’échantillons biologiques, notamment les cultures cellulaires, le sang et les tissus de mammifères.

Par ailleurs, les échantillons difficiles à lyser, tels que les bactéries, les levures et les végétaux, peuvent être soumis à des étapes de traitement supplémentaires qui favorisent la lyse des cellules. Ce kit permet également de purifier l’ARN après une réaction enzymatique ou une extraction au TRIzol®. L’ARN purifié est d’une haute qualité, avec des rapports A260/280 et A260/230 supérieurs à 1,8, des scores RIN (RNA Integrity Number) élevés et une quantité minimale d’ADNg résiduel. En termes de taille, les ARN adsorbés vont des miARN intacts aux ARNr complets.

Par ailleurs, il est possible d’opter pour des conditions soit d’adsorption sélective, soit d’exclusion des ARN de moins de 200 nucléotides (notamment les miARN, les ARNr 5S et les ARNt). L’ARN purifié peut être utilisé dans des applications en aval telles que la RT-qPCR, la synthèse d’ADNc, le RNA-Seq, le Northern blot, etc.

Avantages:
  • Purification d’ARN à partir de sang, de cellules et de tissus
  • Convient également aux échantillons difficiles à lyser (bactéries, levures, végétaux)
  • Purification efficace des ARN totaux, y compris les petits ARN de moins de 200 nt
  • Élimination efficace de l’ADN génomique (sur colonne et avec DNase I)
  • Contient de la protéinase K pour le traitement des échantillons de tissus et de sang
  • Monarch® DNA/RNA Protection Reagent fourni pour la préservation des échantillons
  • Excellent rapport qualité/prix
  • Composants du kit disponibles séparément

Tout comme nos kits Monarch pour purification d’ADN, Monarch Total RNA Miniprep Kit a été optimisé pour offrir des performances maximales avec un impact environnemental minimal, et tous les composants, colonnes et tampons sont disponibles séparément.

Les ARN totaux de divers échantillons ont été purifiés avec Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB réf. T2010). Des aliquotes ont été analysées sur Agilent® Bioanalyzer® 2100 à l’aide d’une puce RNA 6000 Nano (pour l’ARN de S. cerevisiae, une analyse Nano pour échantillons végétaux a été réalisée). Les valeurs RIN et les rapports de D.O. confirment l’intégrité et la pureté globales des ARN. Afin de démontrer la compatibilité des échantillons avec les applications en aval, ceux-ci ont ensuite été utilisés dans des réactions : (A) de RT-PCR (+/– RT) pour la détection de 4 ARN différents avec Protoscript® II Reverse Transcriptase (NEB réf. M0368) / LongAmp® Taq DNA Polymerase (NEB réf. M0323), (B) de préparation de banques NGS avec NEBNext® Ultra™ II RNA Library Prep Kit (NEB réf. E7760) et (C) de RT-qPCR avec Luna® Universal One-Step RT-qPCR Kit (NEB réf. E3005).

Les taux de transcrits dans l’Universal Human Reference RNA (UHRR, Agilent) ont été comparés avant et après repurification soit avec Qiagen RNeasy®, soit avec Monarch Total RNA Miniprep Kit. Une forte corrélation avec l’UHRR non traité a été observée pour les deux méthodes (coefficient de Pearson R > 0,99 pour les deux échantillons). Les échantillons présentaient tous deux une couverture constante de l’ensemble des transcrits, ce qui indique l’absence d’une dégradation détectable lors de la purification. Les ARN polyadénylés ont été isolés à partir de 100 ng de chaque échantillon (non traité ou purifié à l’aide du kit Qiagen ou Monarch) avec NEBNext Poly(A) mRNA Magnetic Isolation Module (NEB réf. E7490). Des banques RNA-Seq ont ensuite été préparées avec NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit pour Illumina® (NEB réf. E7760), avant d’être séquencées sur un instrument MiSeq® (2 x 150). 1,6 million de lectures ont été échantillonnées de manière aléatoire dans chaque banque et les adaptateurs ont été supprimés (SeqPrep v1.1). Les taux de tous les transcrits répertoriés dans Gencode v26 ont été calculés à l’aide de Salmon (0.4) et représentés dans le graphique supérieur (A). La couverture 5′→3′ moyenne des transcrits répertoriés dans Gencode v26 – calculée par CollectRnaSeqMetrics 1.56 (Picard) après alignement sur le génome de référence GRCh38 avec Hisat v2.0.3 et suppression des doublons avec MarkDuplicates 1.56 (Picard) – est illustrée dans le graphique inférieur (B).

Listes des produits disponibles

PRODUITS REF. COND. PLUS D’INFOS PRIX
Monarch™ Total RNA Miniprep Kit T2010S 50 preps NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Monarch™ Microfuge Tube EcoRack T5020S 2 racks Produktinformationen In den Shop wechseln
Colonnes disponibles séparément
Monarch™ RNA Purification Columns T2007L 100 preps NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Monarch™ gDNA Removal Columns T2017L 100 preps NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Monarch™ Collection Tubes II T2018L 100 preps NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Tampons & réactifs disponibles séparément
Monarch™ DNA/RNA Protection Reagent T2011L 56 ml NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Monarch™ RNA Lysis Buffer T2012L 100 ml NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Monarch™ Total RNA Miniprep Enzyme Pack T2019L 1 pack NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Monarch™ RNA Priming Buffer T2013L 56 ml NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Monarch™ RNA Wash Buffer T2014L 50 ml NEB Shop_icon NEB Shop_icon
Nuclease-free Water B1500S/L 25 ml / 4×25 ml NEB Shop_icon NEB Shop_icon

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