NEB propose plusieurs souches d’E. coli avec différents niveaux de contrôle de l’expression. Toutes sont résistantes au phage T1 et présentent des efficacités de transformation extrêmement élevées.
NEB Express est une souche dérivée de BL21 améliorée, disponible avec (NEB réf. C3037) ou sans (NEB réf. C2523) renforcement du contrôle de l’expression par lacIq.
En matière d’expression chez E. coli, le système T7 est l’approche la plus répandue pour la production de protéines. Dans ce système, un vecteur d’expression contenant un gène d’intérêt cloné en aval du promoteur T7 est introduit dans une souche d’expression appropriée (telle que DE3 ou T7 Express), qui possède une copie chromosomique du gène de l’ARN polymérase du phage T7 contrôlée par un promoteur lac. L’ajout de l’inducteur entraîne l’expression de l’ARN polymérase T7, qui assure alors la transcription du gène d’intérêt. Les souches T7 Express sont disponibles avec les éléments de contrôle lacIq et/ou lysY. Le gène lysY code pour une variante du lysozyme T7 qui inhibe naturellement l’ARN polymérase T7, contrôlant ainsi l’expression basale du gène cible. LysY est exprimé à partir d’un plasmide mini-F à copie unique ne nécessitant pas de pression de sélection antibiotique pour se propager. T7 Express lysY/Iq (NEB réf. C3013) offre le niveau de contrôle d’expression le plus élevé.
BL21(DE3) (NEB réf. C2527) convient à l’expression T7 de routine. Lemo21(DE3) (NEB réf. 2528) est une souche conçue pour une expression régulable des cibles difficiles – telles que les protéines membranaires, toxiques ou insolubles – avec le système T7. NiCo21(DE3) (NEB réf. C2529) est une souche récemment développée pour améliorer le rendement des protéines à étiquette polyhistidine.
Les souches SHuffle® permettent la formation de ponts disulfures dans le cytoplasme. Normalement, la présence de réductases dans le cytoplasme d’E. coli maintient les cystéines sous leur forme réduite, ce qui empêche les liaisons S-S de se former dans ce compartiment. Dans les souches SHuffle, la formation de ponts disulfures est rendue possible grâce à la délétion des gènes de la glutarédoxine réductase et de la thiorédoxine réductase (Δgor ΔtrxB). La combinaison de ces délétions est létale, mais une mutation au niveau de la péroxyrédoxine (ahpC*) permet de remédier à ce problème. D’autre part, SHuffle exprime une version de la protéine disulfure isomérase périplasmique DsbC sans sa séquence signal, qui reste ainsi dans le cytoplasme. Il a été démontré que cette enzyme favorise le repliement correct des protéines à ponts disulfures et rétablit les liaisons S-S mal formées. Le gène de la DsbC cytoplasmique est présent sur le chromosome.
Souches d’expression E. coli disponibles :
Souche | NEB réf. |
Caractéristiques |
BL21 Competent E. coli | C2530 |
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BL21(DE3) Competent E. coli | C2527 |
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NEB Express Competent E. coli | C2523 |
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NEB Express Iq Competent E. coli | C3037 |
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T7 Express Competent E. coli | C2566 |
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T7 Express Iq Competent E. coli | C3016 |
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T7 Express lysY Competent E. coli | C3010 |
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T7 Express lysY/Iq Competent E. coli | C3013 |
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T7 Express Crystal Competent E. coli | C3022 |
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SHuffle Express Competent E. coli | C3028 |
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SHuffle T7 Express Competent E. coli | C3029 |
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SHuffle T7 Express lysY Competent E. coli | C3030 |
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SHuffle T7 Competent E. coli | C3026 |
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NiCo21(DE3) Competent E. coli | C2529 |
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Lemo21(DE3) Competent E. coli | C2528 |
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Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com