Souches d’expression de E.coli

NEB propose plusieurs souches d’E. coli avec différents niveaux de contrôle de l’expression. Toutes sont résistantes au phage T1 et présentent des efficacités de transformation extrêmement élevées.

NEB Express est une souche dérivée de BL21 améliorée, disponible avec (NEB réf. C3037) ou sans (NEB réf. C2523) renforcement du contrôle de l’expression par lacI^q.

En matière d’expression chez E. coli, le système T7 est l’approche la plus répandue pour la production de protéines. Dans ce système, un vecteur d’expression contenant un gène d’intérêt cloné en aval du promoteur T7 est introduit dans une souche d’expression appropriée (telle que DE3 ou T7 Express), qui possède une copie chromosomique du gène de l’ARN polymérase du phage T7 contrôlée par un promoteur lac. L’ajout de l’inducteur entraîne l’expression de l’ARN polymérase T7, qui assure alors la transcription du gène d’intérêt. Les souches T7 Express sont disponibles avec les éléments de contrôle lacI^q et/ou lysY. Le gène lysY code pour une variante du lysozyme T7 qui inhibe naturellement l’ARN polymérase T7, contrôlant ainsi l’expression basale du gène cible. LysY est exprimé à partir d’un plasmide mini-F à copie unique ne nécessitant pas de pression de sélection antibiotique pour se propager. T7 Express lysY/I^q (NEB réf. C3013) offre le niveau de contrôle d’expression le plus élevé.

BL21(DE3) (NEB réf. C2527) convient à l’expression T7 de routine. Lemo21(DE3) (NEB réf. 2528) est une souche conçue pour une expression régulable des cibles difficiles – telles que les protéines membranaires, toxiques ou insolubles – avec le système T7. NiCo21(DE3) (NEB réf. C2529) est une souche récemment développée pour améliorer le rendement des protéines à étiquette polyhistidine.

Les souches SHuffle^® permettent la formation de ponts disulfures dans le cytoplasme. Normalement, la présence de réductases dans le cytoplasme d’E. coli maintient les cystéines sous leur forme réduite, ce qui empêche les liaisons S-S de se former dans ce compartiment. Dans les souches SHuffle, la formation de ponts disulfures est rendue possible grâce à la délétion des gènes de la glutarédoxine réductase et de la thiorédoxine réductase (Δgor ΔtrxB). La combinaison de ces délétions est létale, mais une mutation au niveau de la péroxyrédoxine (ahpC*) permet de remédier à ce problème. D’autre part, SHuffle exprime une version de la protéine disulfure isomérase périplasmique DsbC sans sa séquence signal, qui reste ainsi dans le cytoplasme. Il a été démontré que cette enzyme favorise le repliement correct des protéines à ponts disulfures et rétablit les liaisons S-S mal formées. Le gène de la DsbC cytoplasmique est présent sur le chromosome.

Souches d’expression E. coli disponibles :

Souche	NEB réf.	Caractéristiques
BL21 Competent E. coli	C2530	Expression de routine sans système T7
BL21(DE3) Competent E. coli	C2527	Expression T7 de routine
NEB Express Competent E. coli	C2523	Souche d’expression polyvalente sans système t7 Dépourvue de protéases
NEB Express Iq Competent E. coli	C3037	Contrôle de l’expression induite par IPTG à partir des vecteurs pLac, pTac et pTrc Dépourvue de protéases
T7 Express Competent E. coli	C2566	Souche d’expression T7 la plus utilisée Dépourvue de protéases
T7 Express Iq Competent E. coli	C3016	Expression T7 Dépourvue de protéases Expression basale réduite
T7 Express lysY Competent E. coli	C3010	Expression T7 Dépourvue de protéases Réduction améliorée de l’expression basale
T7 Express lysY/Iq Competent E. coli	C3013	Expression T7 Dépourvue de protéases Niveau de contrôle d’expression maximal
T7 Express Crystal Competent E. coli	C3022	Expression T7 Dépourvue de protéases Marquage SeMet pour la cristallographie des protéines
SHuffle Express Competent E. coli	C3028	Souche B dépourvue de protéases Repliement correct des protéines à ponts disulfures dans le cytoplasme
SHuffle T7 Express Competent E. coli	C3029	Expression T7 Souche B dépourvue de protéases Repliement correct des protéines à ponts disulfures dans le cytoplasme
SHuffle T7 Express lysY Competent E. coli	C3030	Expression T7 Souche B dépourvue de protéases Contrôle strict de l’expression des protéines toxiques Repliement correct des protéines à ponts disulfures dans le cytoplasme
SHuffle T7 Competent E. coli	C3026	Souche K12 pour expression T7 Repliement correct des protéines à ponts disulfures dans le cytoplasme
NiCo21(DE3) Competent E. coli	C2529	Pureté améliorée pour les protéines cibles isolées par IMAC
Lemo21(DE3) Competent E. coli	C2528	Expression T7 régulable pour les cibles difficiles