LunaScript™ RT SuperMix Kit

Des RT-qPCR robustes avec LunaScript et les master mix Luna pour qPCR

LunaScript RT SuperMix Kit présente le protocole de synthèse du premier brin d’ADNc le plus rapide du marché

Comparaison de protocoles recommandés pour la synthèse d’ADNc. LunaScript RT SuperMix Kit nécessite le temps de réaction le plus court et résiste à des températures élevées, ce qui minimise les problèmes liés à la structure secondaire de l’ARN.

LunaScript RT SuperMix Kit offre une sensibilité, une linéarité et une reproductibilité exceptionnelles dans les RT-qPCR en deux étapes

Des ARN ont été rétrotranscrits en ADNc à l’aide de 1X LunaScript RT SuperMix dans des réactions de 20 μl, dans des conditions standards (25 °C/2 min, 55 °C/10 min, 95 °C/1 min). L’ADNc a ensuite été quantifié par qPCR avec Luna Universal qPCR Master Mix (NEB réf. M3003) et 1 μl d’ADNc comme matrice, en triplicat pour chaque concentration d’échantillon initial. A. Des ARN totaux de cellules Jurkat (dilutions en série de 1 μg à 1 pg) ont été rétrotranscrits en ADNc, qui a ensuite été quantifié par qPCR avec la séquence de la β-actine comme cible. B. ERCC (External RNA Controls Consortium) Mix 1 – contenant 5 × 10⁹ à 50 copies d’ERCC00130 (~10 ng à 10 fg) – a été rétrotranscrit en ADNc, qui a ensuite été quantifié par qPCR.

LunaScript RT SuperMix Kit offre une meilleure détection linéaire des ARN cibles

Des supermix de transcription inverse ont été utilisés selon les recommandations de leurs fabricants respectifs pour synthétiser de l’ADNc à partir de 1 μg – 100 pg d’ARN totaux humains (cellules Jurkat). Les produits ont ensuite été quantifiés par qPCR avec huit cibles d’abondance, de longueur et de taux de GC différents. Les réactions de qPCR ont été réalisées avec Luna Universal qPCR Master Mix (NEB réf. M3003) ou Luna Universal Probe qPCR Master Mix (NEB réf. M3004). Les résultats ont été évalués en termes d’efficacité et de ΔCq, qui mesure la détection à faible concentration et l’absence d’amplification du contrôle sans matrice (NTC) (ΔCq = Cq moyen du NTC – Cq moyen de la concentration la plus faible). Les critères de performance cibles (efficacité = 90-110 %, ΔCq ≥ 3) sont encadrés en vert.