NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System
Le NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System est un système couplant transcription / traduction, conçu pour synthétiser des protéines codées par une matrice d’ADN sous le contrôle d’un promoteur T7 ARN polymérase. Le système offre des niveaux d’expression élevés, une production de protéine de poids moléculaire élevé, une évolutivité et est rentable pour les applications d’expression à haut débit. La vitesse et la robustesse du système facilitent la synthèse des protéines dans des applications telles que l’ingénierie des protéines, les études de mutagenèse et le criblage enzymatique. De plus, il peut être utilisé pour générer des protéines pour des analyses biophysiques et structure-fonction.
- Génère rapidement des quantités analytiques de protéines pour caractérisation
- Synthétise différentes protéines cibles dont la taille varie de 17 à 230 kDa
- Les matrices peuvent être de l'ADN plasmidique, de l'ADN linéaire ou de l'ARNm
- Une activité protéase minimale assure la stabilité de la protéine cible souhaitée
- Conditions de réaction flexibles
- Les réactions peuvent être directement chargées sur un gel SDS-PAGE sans précipitation à l'acétone ou au TCA
Le NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System contient tous les composants nécessaires à la synthèse des protéines, à l’exception de l’ADN matrice. Il s’agit d’une combinaison d’extrait cellulaire hautement actif d’une souche génétiquement modifiée, d’un tampon de réaction et d’une T7 ARN polymérase optimisée, qui, ensemble, donnent une expression robuste d’une grande variété de cibles protéiques allant de 17 à 230 KDa.
La synthèse des protéines est réalisée avec une courte incubation et la protéine synthétisée est compatible avec la purification ou l’analyse en aval par SDS-PAGE, Western Blot ou essai fonctionnel direct. La nouvelle formulation de ce système permet aux échantillons d’être chargés directement sur SDS-PAGE, sans avoir besoin de précipitation à l’acétone ou au TCA. De plus, la protéine synthétisée peut être isolée du mélange réactionnel en utilisant des techniques de purification par affinité, telle que la chromatographie d’affinité sur métal immobilisé (IMAC), pour une caractérisation structurelle et / ou fonctionnelle supplémentaire.
Synthèse protéique avec le NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System
50 µl de réactions contenant 250 ng d’ADN matrice ont été incubées à 37 ° C pendant 3 heures. 2 µl de chaque réaction ont été analysés par SDS-PAGE en utilisant un gel de Tris-glycine à 10-20%. Le point rouge indique la protéine d’intérêt. M = Unstained Protein Standard, Broad range (NEB # P7717), «Neg» = contrôle négatif, pas d’ADN.
Les produits disponibles de la gamme NEBExpress Cell-free :
| PRODUIT | REF. # | COND. | PRIX | ||
|---|---|---|---|---|---|
| NEBExpress Cell-free E. coli Protein Synthesis System | E5360S | 10 rxns |  |
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| E5360L | 100 rxns | |
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| Compatible avec : | |||||
| NEBExpress GamS Nuclease Inhibitor | P0774S | 75 µg | |
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| PURExpress Disulfide Bond Enhancer | E6820S | 50 rxns | |
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PURExpress In Vitro Protein Expression
New England Biolabs vous propose PURExpress In Vitro Protein Synthesis Kit, une méthode rapide d’analyse de l’expression des gènes offrant différents avantages par rapport aux systèmes cellulaires.
Conçu pour une analyse rapide de l’expression des gènes, PURExpress est un nouveau système de transcription/traduction acellulaire, reconstitué à partir des composants purifiés nécessaires à la synthèse de protéines chez E. coli. Exempte de nucléases et de protéases, la plateforme PURExpress préserve l’intégrité des matrices/complexes d’ADN et d’ARN, et produit des protéines sans modification ni dégradation. La transcription et la traduction sont réalisées en une réaction à une étape, qui se prépare en mélangeant tout simplement deux réactifs. Avec des résultats disponibles en quelques heures, PURExpress vous permet de gagner du temps et est idéal pour les technologies à haut débit.
PURExpress repose sur la technologie PURE développée par Dr Takuya Ueda à l’Université de Tokyo et commercialisée par Biocomber (Tokyo, Japon) sous le nom de PURESYSTEM®.
- Système exempt de protéases ou de nucléases endogènes – Pas de dégradation des échantillons
- Flexibilité – Produit formulé de façon à permettre des modifications
- Analyse facile – Possibilité de visualiser les protéines synthétisées sur un gel coloré au bleu de Coomassie
- Simplicité d’utilisation – Seulement deux réactifs à mélanger et l’ADN matrice (circulaire ou linéaire) à ajouter
- Rapidité – Réaction complète en environ deux heures
- Efficacité – Un meilleur contrôle de la machinerie de traduction et de repliement grâce à l’utilisation de composants purifiés
- Stabilité – Résistance à plusieurs cycles de congélation/décongélation
Expression et purification de DHFR (A) et de l’ADN ligase du phage T4 (B) à l’aide de PURExpress.
Des réactions de 125 μl ont été réalisées selon les recommandations du manuel d’utilisation. Les échantillons ont été analysés sur un gel Tris-glycine 10-20 % et colorés au bleu de Coomassie. Dans les deux cas, la protéine cible est visible dans la fraction protéique totale. Le point rouge indique la protéine d’intérêt. La piste M correspond au: Protein Ladder réf. P7703
Liste des produits
| PRODUIT | REF. # | COND. | PRIX | ||
|---|---|---|---|---|---|
| PURExpress® In vitro Protein Synthesis Kit | E6800S | 10 rxns | |
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| E6800L | 100 rxns | |
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| PURExpress® Delta Ribosome Kit | E3313S | 10 rxns | |
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| PURExpress® Delta (aa, tRNA) Kit | E6840S | 10 rxns | |
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| PURExpress® Delta RF123 Kit | E6850S | 10 rxns | |
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| Produits connexes: | |||||
| PURExpress® Disulfide Bond Enhancer | E6820S | 50 rxns | |
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| E. coli Ribosome | P0763S | 1 mg | |
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| Murine RNase Inhibitor | M0314S | 3.000 units | |
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| M0314L | 15.000 units | |
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As of: 01.01.2020
Licenses/Patents/Disclaimers: PURExpress® is based on the PURE System Technology originally developed by Dr. Takuya Ueda at the University of Tokyo and commercialized as the PURESYSTEM® by BioComber (Tokyo, Japan). Licensed from BioComber (Tokyo, Japan) under Patent Nos. 7,118,883; WO2005-105994 and JP2006-340694. For research use only. Commercial use of PURExpress® Δ Ribosome Kit requires a license from New England Biolabs, Inc.
Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com
Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com
