NEB PCR Cloning Kit contient un master mix de clonage 2X optimisé avec un agent exclusif favorisant la ligature, ainsi qu’un vecteur linéarisé utilisant un mécanisme innovant de suppression des colonies sans insert, pour un bruit de fond réduit.
Ce kit permet de cloner facilement et rapidement n’importe quel produit de PCR, qu’il ait été amplifié par une ADN polymérase à activité de relecture (telle que Q5® ou Phusion®) qui produit des extrémités franches, ou par une ADN polymérase sans activité de relecture (telle que Taq ou un mélange contenant celle-ci, par exemple OneTaq® ou LongAmp™ Taq) qui produit des extrémités dépassant d’une base. Cela est possible grâce à la présence dans le master mix de composants « invisibles », capables de polir les extrémités et actifs lors de l’étape de ligature.
Avec ce kit, il est également possible de cloner directement des produits d’amplification sans purification, que les amorces PCR utilisées possèdent des groupes 5′-phosphate ou non.
Un produit de PCR de 500 pb a été incubé avec le vecteur linéarisé (3:1) selon le protocole recommandé. Les cellules NEB 10-beta Competent E. coli fournies ont été transformées avec 2 μl du produit de réaction et 1/20e de la culture a été étalé sur une boîte de Pétri. À gauche : cellules transformées avec le vecteur uniquement (contrôle) ; à droite : cellules transformées avec l’insert PCR.
- Clonage facile de tous les produits de PCR (extrémités franches ou TA)
- Clonage rapide avec une étape de ligature de 5 minutes
- Criblage simplifié, avec un bruit de fond faible ou nul et sans sélection bleu/blanc
- Gain de temps grâce à l’élimination des étapes de purification
- Sites de restriction flanquants pour un sous-clonage facile, avec des possibilités de digestion en deux sites par une même enzyme
- Amorces fournies pour le criblage des colonies par PCR ou le séquençage en aval
- Kit prêt à l’emploi contenant un amplicon de contrôle de 1 kb, un vecteur de clonage linéarisé et des cellules E. coli compétentes préaliquotées à usage unique
- Délai de péremption supérieur (12 mois) à celui de certains produits disponibles sur le marché
Carte de restriction du vecteur pMiniT
La carte de restriction ci-dessus montre le plasmide en l’absence d’insert. Les sites de restriction uniques sont indiqués en noir. Les autres sites de restriction, qui peuvent être utilisés pour un sous-clonage, sont indiqués en rouge. L’encadré inférieur détaille l’emplacement des amorces de séquençage, des sites de restriction pour le sous-clonage et du site d’insertion au sein du minigène toxique.
Liste des produits disponibles
| PRODUIT | REF. | COND. | PRIX | PLUS D’INFOS |
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| NEB PCR Cloning Kit (incl. E. coli competent Cells) | E1202 S | 20 rxns |  |
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| NEB PCR Cloning Kit (Without Competent Cells) | E1203 S | 20 rxns | |
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Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com
