Ligase Master Mixes

Blunt/TA Ligase Master Mix

Blunt/TA Ligase Master Mix (NEB réf. M0367) est spécialement formulé pour optimiser la ligature des substrats à extrémités franches ou dépassant d’une seule base, ainsi que la transformation de cellules compétentes à l’aide des produits de ligature obtenus. Ce format prêt à l’emploi simplifie la préparation des réactions, permettant une ligature rapide et robuste avec des proportions optimales d’enzyme et de tampon. Les produits réactionnels peuvent être utilisés directement pour transformer différentes souches d’E. coli chimiquement compétentes, sans dilution préalable.

Blunt/TA Ligase Master Mix présente de meilleures performances que les produits concurrents :

Des réactions de ligature de vecteurs/inserts à extrémités franches ou T/A ont été préparées en duplicat selon les indications des fournisseurs des master mix testés. Des quantités égales d’ADN ligaturé ont été utilisées pour transformer des cellules NEB 10-beta Competent E. coli (NEB réf. C3019), qui ont ensuite été étalées sur des boîtes de Pétri en triplicat. Les moyennes des résultats de transformation ont été exprimées en pourcentage de la réaction la plus efficace (c’est-à-dire la ligature T/A réalisée avec Blunt/TA Ligase Master Mix) et représentées sur un graphique.

Instant Sticky-end Ligase Master Mix

Composé de la T4 DNA Ligase (NEB réf. M0202), d’un agent exclusif favorisant la ligature et d’un tampon réactionnel optimisé, Instant Sticky-end Ligase Master Mix (NEB réf. M0370) permet une ligature instantanée sans incubation. Spécialement formulé pour une ligature rapide des substrats à extrémités cohésives (2-4 pb) et une transformation optimale, ce master mix simplifie la préparation des réactions et réduit le temps nécessaire aux ligatures classiques. Les produits réactionnels peuvent être utilisés directement pour transformer différentes souches d’E. coli chimiquement compétentes, sans dilution préalable.

Instant Sticky-end Ligase Master Mix offre une ligature robuste sans étape d’incubation :

Des réactions contenant 20 ng de pUC19 digéré par SacI/SphI et une quantité molaire 3 fois supérieure d’un fragment de 1,6 kb d’un autre plasmide présentant des extrémités compatibles ont été préparées avec Instant Sticky-end Ligase Master Mix. Sans aucun temps d’incubation supplémentaire, 2 µl ont immédiatement été prélevés et utilisés pour transformer 50 µl de cellules NEB 10-beta Competent E. coli (NEB réf. C3019). Une aliquote de 50 µl de la culture de 1 ml a été étalée sur un milieu sélectif et incubée la nuit à 37 °C. Plusieurs centaines de colonies ont été obtenues.