Monarch RNA Cleanup Kit est une solution simple et rapide qui permet, à l’aide de colonnes à centrifuger à base de silice, de purifier et de concentrer l’ARN après une réaction enzymatique (transcription in vitro, traitement à la DNase I, ajout d’une coiffe et marquage, par exemple), ainsi qu’après d’autres méthodes de purification telles qu’une extraction au phénol/chloroforme.
Monarch RNA Cleanup Kit est disponible dans 3 capacités d’adsorption différentes :
- 10 μg (NEB réf. T2030)
- 50 μg (NEB réf. T2040)
- et 500 μg (NEB réf. T2050).
Chaque kit contient des colonnes uniques conçues pour empêcher la rétention de tampon et la contamination croisée, ce qui permet d’éluer des ARN ultrapurs dans de faibles volumes. Des ARN de plus de 25 nt peuvent être purifiés à l’aide de ce kit avec le protocole standard ; il existe également un protocole modifié permettant d’adsorber des ARN de seulement 15 nt (y compris les miARN).
- Disponible dans 3 capacités d’adsorption et gammes de volumes d’élution différentes
- Purification rapide et facile de grandes quantités d’ARN de qualité à partir de réactions de transcription in vitro
- Élimination efficace des nucléotides non incorporés de vos échantillons d’ARN
Principales applications
| Purification et concentration d’ARN (y compris à partir de la phase aqueuse issue d’une extraction au TRIzol) | Purification plus poussée d’ARN précédemment purifiés par d’autres méthodes |
| Purification après une réaction enzymatique | Élimination des enzymes telles que les ARN polymérases, la DNase I, la protéinase K et les phosphatases, pour un dessalage efficace |
| Purification après une réaction de transcription in vitro | Élimination des enzymes et des NTP en excès, pour des ARN synthétiques ultrapurs |
| Extraction d’ARN sur gel | Purification d’ARN à partir de gels d’agarose |
| Fractionnement d’ARN | Fractionnement en ARN de petite et de grande taille |
Plusieurs capacités d’adsorption et volumes d’élution au choix
| Monarch RNA Cleanup Kit | NEB réf. T2030 (10 µg) | NEB réf. T2040 (50 µg) | NEB réf. T2050 (500 µg) |
|---|---|---|---|
| Capacité d’adsorption : | 10 μg | 50 µg | 500 µg |
| Taille de l’ARN : | ≥ 25 nt ( ≥ 15 nt with modified protocol) | ||
| Rendement habituel : | 70–100% | ||
| Volume d’élution : | 6–20 µl | 20–50 µl | 50–100 µl |
| Pureté : | A260/280 > 1.8 and A260/230 > 1.8 | ||
| Durée du protocole : | 5 minutes of spin and incubation time | 10–15 minutes of spin and incubation time | |
| Principales applications en aval : | RT-PCR, RNA library prep for NGS, Small RNA library prep for NGS, RNA labeling | RT-PCR, RNA library prep for NGS, formation of RNP complexes for genome editing, microinjection, RNA labeling, transfection | RT-PCR, RNA library prep for NGS, RNA labeling, RNAi, microinjection, transfection |
Purification de grandes quantités d’ARN à partir de réactions de transcription in vitro
Des ARN ribosomiques (10, 50 ou 500 µg d’ARNr 16S et 23S d’E. coli, Sigma) ont été purifiés à l’aide de Monarch RNA Cleanup Kit 10 µg (NEB réf. T2030), 50 µg (NEB réf. T2040) ou 500 µg (NEB réf. T2050) respectivement. De l’eau exempte de nucléases a été utilisée pour éluer les ARN. Le rendement en ARN a été calculé en mesurant A260 à l’aide d’un spectrophotomètre Trinean DropSense 16. Environ 80 % des ARN ont été récupérés dans un volume de 6 µl pour Monarch RNA Cleanup Kit 10 µg (NEB réf. T2030), de 20 µl pour Monarch RNA Cleanup Kit 50 µg (NEB réf. T2040) et de 50 µl pour Monarch RNA Cleanup Kit 500 µg (NEB réf. T2050).
1/ Protocole de Monarch RNA Cleanup Kit
Cette vidéo vous montre comment utiliser Monarch RNA Cleanup Kit pour purifier l’ARN rapidement et facilement après une réaction enzymatique (transcription in vitro, marquage et traitement à la DNase I, par exemple).
2/ Conseils pour une purification d’ARN réussie avec Monarch RNA Cleanup Kit
Cette vidéo vous propose des conseils simples et rapides pour optimiser vos purifications d’ARN.
3/ Comment éviter les contaminations par RNase
Cette vidéo aborde les sources de contamination par RNase et vous explique comment les éviter lors de vos expériences.
D’autres tutoriels vidéo sont disponibles sur la chaîne YouTube de NEB.
Monarch RNA Cleanup Kit (500 µg) convient à la purification de grandes quantités (> 250 µg) d’ARN à partir de réactions de transcription in vitro
1. Des ARN de différentes tailles (0,6-8 kb) ont été synthétisés à l’aide de HiScribe™ T7 Quick High Yield RNA Synthesis Kit (NEB réf. E2050) à partir de 1,5-1,8 µg d’ADN matrice pendant deux heures à 37 °C. Les ARN transcrits in vitro (40 µl de chaque réaction) ont été purifiés avec Monarch RNA Cleanup Kit (500 µg, T2050) et élués dans un volume de 200 µl. Les rendements en ARN ont été calculés en mesurant A260 à l’aide d’un spectrophotomètre NanoDrop® et étaient compris entre 268 et 425 µg par réaction.
2. L’intégrité des ARN (200 ng/piste) a été évaluée sur un gel d’agarose-TBE 1 % coloré au SYBR® Gold.
Élimination efficace des nucléotides non incorporés
Monarch RNA Cleanup Kit (50 µg) offre des rendements en ARNg comparables à ceux d’autres kits de purification d’ARN du marché, avec une quantité réduite de NTP résiduels
Les produits de six réactions de synthèse d’ARN guide unique différentes, réalisées à l’aide d’EnGen® sgRNA Synthesis Kit, S. pyogenes (NEB réf. E3322), ont été purifiés avec Monarch RNA Cleanup Kit (50 µg, NEB réf. T2040) ou un kit concurrent (selon les recommandations du fabricant) et élués avec 50 µl d’eau exempte de nucléases. Les rendements en ARNg ont été calculés en mesurant A260 à l’aide d’un spectrophotomètre Trinean Dropsense™ 16. Les rendements obtenus avec Monarch RNA Cleanup Kit étaient comparables à ceux d’autres kits de purification d’ARN du marché.
Après purification, les quantités de nucléotides (NTP) résiduels ont été mesurées par LC-MS et exprimées en pourcentage de l’aire des pics des NTP (rATP+rCTP+rGTP+rUTP) par rapport à l’aire du pic de l’ARNg. Monarch RNA Cleanup Kit a permis une meilleure élimination des NTP résiduels des produits de synthèse d’ARNg par rapport à tous les autres kits de purification d’ARN du marché testés.
Liste produits
| PRODUIT | REF. | COND. | PRIX | PLUS D’INFOS |
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| EnGen sgRNA Synthesis Kit, S. pyogenes | E3322S | 20 rxns |  |
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Type d’échantillon : levure (mycélium frais). Élément de comparaison : RNeasy Mini Kit (Qiagen). « Un rendement plus élevé, une meilleure qualité, un protocole simple et de bons résultats cohérents sur l’ensemble des échantillons. » Gisele, associé de recherche, Université d’État du Mississippi, États-Unis |
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Type d’échantillon : bactéries à Gram positif. Élément de comparaison : RNeasy Mini Kit (Qiagen). « J’utilise le kit RNeasy depuis un certain temps, sans grand succès. Celui-ci semble adapté aux eucaryotes, alors que je travaille sur des procaryotes à Gram positif… J’ai essayé [Monarch Total] RNA Miniprep Kit de NEB, qui est bien plus simple. J’ai obtenu d’excellents résultats du premier coup. » Kyle, chercheur postdoctoral, Université de Californie, États-Unis |
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Type d’échantillon : cellules CD34. « J’ai réalisé l’extraction d’ARN plusieurs fois avec [Monarch Total RNA Miniprep Kit de NEB]. La qualité des ARN a été vérifiée sur TapeStation. Les quatre échantillons étaient tous de bonne qualité, avec un RIN compris entre 8,3 et 9,3… Votre kit d’extraction d’ARN est facile à utiliser et me fait gagner du temps. » Chercheur, UCL Great Ormond Street Institute of Child Health, Royaume-Uni |
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Type d’échantillon : protoplastes d’avoine. Élément de comparaison : RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen). « J’ai comparé le rendement et la pureté de l’ARN à l’aide d’un spectromètre (NanoDrop). J’ai obtenu 5 fois plus d’ARN et mon échantillon était plus pur avec Monarch RNA Miniprep qu’avec le kit RNeasy de Qiagen que j’utilise d’habitude. » Chercheur, Université d’État de l’Iowa, États-Unis |
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Type d’échantillon : cœur de souris. Élément de comparaison : GeneJET RNA Isolation Kit (Thermo Fisher Scientific). « J’ai apprécié la reproductibilité, la simplicité d’utilisation et le fait que le kit contient tous les éléments nécessaires (la DNase et la protéinase K, par exemple). La concentration et la qualité des ARN extraits avec le kit Monarch étaient légèrement plus élevées qu’avec le kit GeneJET. La principale différence résidait dans la cohérence des extractions entre les échantillons, qui était bien meilleure avec le kit Monarch. » Natalie, étudiante en doctorat, Winnipeg, Canada |
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Type d’échantillon : ARN viral à partir d’un surnageant de culture cellulaire. Élément de comparaison : extraction au TRIzol. « J’ai essayé d’extraire les ARN de différents échantillons à l’aide du kit Monarch, en parallèle d’extractions au TRIzol en duplicat. Les premiers résultats, comme le montre l’analyse des ARN extraits sur NanoDrop, étaient très positifs. » Jessica Purcell, Pirbright Institute, Royaume-Uni |
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Brochure:
Monarch Nucleic Acid Purification
Feature Article:
Polymerase Fidelity: What is it, and what does it mean for your PCR?
Liste produits
| PRODUIT | REF. | COND. | PRIX | PLUS D’INFOS |
|---|---|---|---|---|
| Monarch RNA Cleanup Kit (10 µg) | T2030S | 10 preps | |
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| T2030L | 100 preps | |||
| Monarch RNA Cleanup Kit (50 µg) | T2040S | 10 preps | |
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| T2040L | 100 preps | |||
| Monarch RNA Cleanup Kit (500 µg) | T2050S | 10 preps | |
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| T2050L | 100 preps | |||
| NOUVEAU Monarch™ Microfuge Tube EcoRack | T5020S | 2 racks | |
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Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com
