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Q5 High Fidelity DNA Polymerase

La fidélité par excellence

Q5® High-Fidelity DNA Polymerase établit une nouvelle référence en matière de fidélité, de performances et de robustesse. Grâce à une fidélité inégalée (plus de 100 fois supérieure à celle de Taq), cette ADN polymérase offre des taux d’erreur extrêmement faibles. Q5 High-Fidelity DNA Polymerase est une nouvelle polymérase fusionnée au domaine de liaison à l’ADN de Sso7d de façon à améliorer sa processivité, sa vitesse, sa fidélité et sa fiabilité.

Avantages:
  • Fidélité inégalée (~280 fois supérieure à celle de la Taq ADN polymérase)
  • Taux d’erreur extrêmement faibles
  • Excellentes performances pour une vaste gamme d’amplicons (riches en AT ou GC)
  • Formats hot start et master mix disponibles

Le tampon de Q5 High-Fidelity DNA Polymerase est conçu pour permettre des performances exceptionnelles avec une optimisation minimale, quel que soit le taux de GC des amplicons. Pour les matrices classiques ou complexes avec un pourcentage de GC allant jusqu’à environ 65 %, l’utilisation de Q5 Reaction Buffer garantit une amplification fiable et robuste. Pour les séquences composées de plus de 65 % de GC, l’ajout de Q5 High GC Enhancer permet de maintenir des performances optimales. Q5 High-Fidelity DNA Polymerase et Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase sont disponibles séparément ou dans un format master mix pratique. Les master mix contiennent des dNTP, du Mg2+ et le tampon nécessaire.

Comparaison de polymérases haute fidélité :

1 Nous continuons d’étudier d’autres méthodes pour mesurer la fidélité de Q5 High-Fidelity DNA Polymerase
avec le plus de précision possible (Potapov, V. et Ong, J.L. (2017) PLoS
ONE. 12(1) : e0169774).
Criblage de mutations dans lacZ (NEB), lacI (Agilent) ou rpsL (Life) par PCR
3 Takagi et al. (1997) Appl. Env. Microbiol. 63, 4504-4510.

Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase

Contrairement aux polymérases hot start chimiquement modifiées ou inhibées par anticorps, Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase de NEB repose sur un aptamère synthétique unique. Cette molécule se lie à la polymérase via des interactions non covalentes et bloque son activité durant la préparation de la réaction. L’enzyme est activée dans les conditions normales de thermocyclage, ce qui permet de préparer les réactions à température ambiante. Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase ne nécessite pas d’étape d’activation thermique séparée, offrant ainsi des temps de réaction réduits et une simplicité d’utilisation accrue. Cette ADN polymérase est idéale pour l’amplification spécifique et robuste de séquences variées, quel que soit leur taux de GC.

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Informations

Figure 1 :  Amplification robuste avec Q5 High-Fidelity DNA Polymerases (A) et Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerases (B), quel que soit le taux de GC

Amplification de diverses séquences génomiques humaines à taux de GC croissants avec Q5 High-Fidelity DNA Polymerase ou Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase. Les réactions utilisant Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase ont été préparées à température ambiante. Toutes les réactions ont été soumises à 30 cycles d’amplification. Les résultats ont été visualisés par analyse microfluidique LabChip®.

Figure 2 :  Performances d’amplification pour un large éventail de cibles génomiques

Des réactions de PCR ont été réalisées sur différents amplicons allant de forts taux d’AT à des taux de GC élevés, avec Q5 et d’autres ADN polymérases du marché. Toutes les enzymes ont été utilisées selon les recommandations de leurs fabricants respectifs, avec des tampons et des agents favorisant l’amplification de séquences riches en GC le cas échéant. Le rendement et la pureté des produits réactionnels ont été mesurés et représentés, comme indiqué dans la légende de la figure, par la taille et la couleur des points. Un gros point vert foncé correspond aux performances les plus élevées. Q5 donne des résultats optimaux quel que soit le taux de GC.

Figure 3 : Amplification inégalée avec Q5 High-Fidelity DNA Polymerase, quel que soit le taux de GC de la matrice

L’amplification de diverses séquences génomiques humaines à taux de GC croissants montre les excellentes performances de Q5 High-Fidelity DNA Polymerase pour un large éventail de matrices. Toutes les réactions ont été effectuées avec 20 ng de matrice et soumises à 30 cycles d’amplification. Les résultats ont été visualisés par analyse microfluidique LabChip®. Les polymérases concurrentes ont été utilisées selon les recommandations de leurs fabricants respectifs. Pour les trois derniers amplicons, les tampons ou les agents favorisant l’amplification de séquences riches en GC fournis avec les polymérases (le cas échéant) ont été ajoutés.

Figure 4 : Amplification inégalée avec Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase, quel que soit le taux de GC de la matrice

L’amplification de diverses séquences génomiques humaines à taux de GC croissants montre les excellentes performances de Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase pour un large éventail de matrices. Toutes les réactions ont été préparées à température ambiante avec 20 ng de matrice et soumises à 30 cycles d’amplification. Les résultats ont été visualisés par analyse microfluidique LabChip®. Les polymérases concurrentes ont été utilisées selon les recommandations de leurs fabricants respectifs. Pour les trois derniers amplicons, les tampons ou les agents favorisant l’amplification de séquences riches en GC fournis avec les polymérases (le cas échéant) ont été ajoutés.

Tableau : Comparaison d’ADN polymérases haute fidélité

1 Criblage de mutations dans lacZ (NEB), lacI (Agilent) ou rpsL (Life) par PCR
2 Takagi et al. (1997) Appl. Env. Microbiol. 63, 4504-4510.
3 Matrice non indiquée.
4 Matrices simples : ADN plasmidique, viral et génomique (E. coli). Matrices complexes : ADN génomique végétal, humain et d’autres mammifères.
5 Valeurs fournies par les fabricants respectifs.

Produits disponibles

PRODUIT REF. COND. PRIX
Q5 High Fidelity DNA Polymerase M0491S/L 100/500 units 96€ / 424
NEB Shop_icon
Q5 High Fidelity 2X Master Mix M0492S/L 100/500 units 157€ / 628€ NEB Shop_icon
Q5 Hot Start High Fidelity DNA Polymerase M0493S/L 100/500 units 112€ / 508€ NEB Shop_icon
Q5 Hot Start High Fidelity 2X Master Mix M0494S/L/X 100/500 rxn 180€ / 720€ / 712€ NEB Shop_icon
Disponible aussi avec Q5 High-Fidelity PCR Kit :
Q5 High-Fidelity PCR Kit E0555S/L 50/200 rxns 91 € / 308 € NEB Shop_icon
Disponible aussi avec la formule optimisée Next-Gen-Seq :
NEBNext High Fidelity 2X PCR Master Mix M0541S/L 50/250 rxns 90 € / 360 € NEB Shop_icon

 

PRODUIT REF. COND. PRIX
Deoxynucleotide Solutions, Mix N0447S 8 µmol each 59 € NEB Shop_icon
Deoxynucleotide Solutions, Mix N0447L 40 µmol each 236 € NEB Shop_icon

Phusion® est une marque déposée de Thermo Fisher Scientific.  Phusion® DNA Polymerase a été développée par Finnzymes Oy, qui fait désormais partie de Thermo Fisher Scientific. AccuPrime™ est une marque de Life Technologies, Inc. Platinum® est une marque déposée de Life Technologies, Inc. PfuUltra™ est une marque d’Agilent Technologies, Inc. Q5®, Deep Vent™ et 9°N™ sont des marques de New England Biolabs, Inc. Vent™ est une marque déposée de New England Biolabs, Inc. LabChip® est une marque déposée de Caliper Life Sciences, une société Perkin Elmer, Inc.

Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com