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NEB Buffer System

NEB CutSmart Buffer

Plus de 200 de nos enzymes de restriction sont 100 % actives dans un tampon unique, CutSmart Buffer, ce qui facilite considérablement la préparation de vos réactions de double digestion. Comme le CutSmart Buffer contient de la BSA, le nombre de tubes à gérer et de pipetages à effectuer est réduit. En outre, de nombreuses enzymes de modification de l’ADN sont 100 % actives dans le CutSmart Buffer, ce qui élimine la nécessité d’une étape de purification ultérieure.

Quels sont les avantages du nouveau système tampon de NEB ?

L’ancien système tampon fonctionnait bien, mais NEB s’efforce d’améliorer en permanence la praticité et les performances de ses produits pour ses clients. En ajoutant de la BSA au tampon, nous avons pu porter à plus de 200 le nombre d’enzymes capables de digérer l’ADN dans un tampon unique, pour une simplicité d’utilisation accrue, en particulier dans le cas des doubles digestions. De plus, vous n’avez plus besoin d’ajouter la BSA séparément.

Détails Techniques

NEBuffer Activity/ Performance Chart

Retrouvez le graphique “The NEBuffer Activity/ Performance Chart” ICI!

Activity of DNA Modifying Enzymes in CutSmart Buffer

CutSmart_Modifier_Compatibility

FAQ

Q : Le passage au nouveau système tampon modifie-t-il les propriétés des enzymes de restriction ?
R : La nature des enzymes de restriction reste inchangée. Cependant, la BSA améliore l’activité de certaines d’entre elles. Par conséquent, afin de maintenir le titre enzymatique de ces produits dans les limites des spécifications, la concentration protéique a été légèrement ajustée le cas échéant.

Q : Quel NEBuffer dois-je utiliser pour un ancien tube d’enzyme de restriction ?
R : Toutes les enzymes de restriction de NEB sont étiquetées avec un code couleur indiquant le NEBuffer approprié. Ce système peut être utilisé soit avec le NEBuffer précédemment fourni, soit avec le nouveau tampon recommandé. Nous avons conservé le code couleur de nos tubes de tampons et d’enzymes, afin de vous permettre de trouver facilement le tampon recommandé pour chaque enzyme.

Q : J’ai un ancien tube d’enzyme de restriction. Est-elle active dans le nouveau tampon ?
R : Oui, à condition que le produit ne soit pas périmé. La composition des nouveaux tampons est quasiment identique, sauf que la BSA a été ajoutée directement au tampon et que le DTT a été supprimé. La BSA n’a aucun effet négatif sur la réaction et peut même la favoriser dans certains cas. Des tests approfondis ont montré que le DTT n’est pas nécessaire.

Q : J’ai un ancien tube de NEBuffer. Puis-je l’utiliser ou dois-je le jeter ?
R : Vous pouvez utiliser l’ancien tube de NEBuffer jusqu’à sa date de péremption. Veuillez suivre les conseils d’utilisation correspondant à l’ancien tampon, notamment en ce qui concerne l’ajout de BSA pour certaines enzymes.

Q : Mon enzyme était livrée avec un autre NEBuffer auparavant, mais c’est désormais CutSmart Buffer qui est recommandé. Pourquoi ?
R : Avec la reformulation des tampons de NEB, certaines enzymes de restriction présentent également des performances optimales dans CutSmart Buffer. Nous pouvons ainsi proposer plus de 200 enzymes de restriction dans un tampon unique pour une praticité accrue, en particulier pour les doubles digestions.

Q : Pourquoi CutSmart Buffer n’est-il pas recommandé pour certaines de vos enzymes ?
R : Certaines enzymes de restriction nécessitent une concentration en sels élevée. Or, CutSmart Buffer est un tampon à faible concentration saline. Plus de 200 de nos enzymes de restriction sont livrées avec CutSmart Buffer, mais pour les autres enzymes, les performances sont optimales dans un autre tampon. Veuillez consulter le tableau « NEBuffer Activity/Performance Chart with Restriction Enzymes » (Activité et performance des enzymes de restriction dans les tampons NEBuffer).

Q : Comment réaliser une double digestion avec deux enzymes dont l’une est livrée avec le nouveau tampon et l’autre avec l’ancien ?
R : Nous vous invitons à vous servir du Double Digest Finder et à utiliser le tampon recommandé. Par exemple, vous avez l’ancien NEBuffer 1 pour l’une des enzymes et CutSmart Buffer pour l’autre. Si le Double Digest Finder suggère NEBuffer 1.1, vous pouvez utiliser NEBuffer 1 + BSA pour la double digestion. En revanche, s’il recommande CutSmart Buffer, vous pouvez tout simplement utiliser le nouveau tampon.

Q : Mon enzyme de restriction était disponible à une concentration inférieure. Pourquoi sa concentration est-elle passée à 10 000 u/ml ?
R : NEB a uniformisé la concentration de bon nombre de ses enzymes de restriction à 10 000 u/ml. Elles sont ainsi plus faciles à utiliser et offrent souvent de meilleures performances grâce à la réduction de la quantité de glycérol dans la réaction.

Q : Pourquoi avez-vous ajouté de la BSA à tous les tampons réactionnels pour enzymes de restriction ?
R : NEB a inclus la BSA dans tous ses tampons d’enzymes de restriction pour simplifier la tâche de ses clients, en leur évitant de devoir l’ajouter séparément. Les réactions sont ainsi plus faciles et rapides à préparer, avec un nombre réduit de tubes à gérer.

Q : Pourquoi avez-vous supprimé le DTT de vos tampons d’enzymes de restriction ?
R : Le DTT entrait dans la formulation des tampons pour des raisons historiques. Couramment utilisé dans de nombreux tampons d’enzymes en biologie moléculaire, le DTT faisait en effet partie de la composition des tampons d’enzymes de restriction lors de leur développement initial. Cependant, après des tests approfondis, nous avons conclu qu’il n’est pas nécessaire à l’activité des enzymes de restriction. En outre, en présence de DTT, la BSA peut parfois former un précipité blanc après plusieurs cycles de congélation/décongélation.

Q : Je ne souhaite pas utiliser de BSA dans mon tampon. Que me proposez-vous ?
R : NEB continue de commercialiser séparément les anciens tampons, qui ne contiennent pas de BSA. Cependant, veuillez noter que la BSA a toujours fait partie de la composition du tampon de stockage des enzymes.

Q : Quelles sont les performances des enzymes de modification de l’ADN de NEB dans CutSmart™ Buffer ?
R : NEB a testé de nombreuses enzymes de modification de l’ADN impliquées dans le processus de clonage. La plupart d’entre elles présentent 100 % d’activité fonctionnelle dans CutSmart™ Buffer. Pour plus d’informations, veuillez consulter le tableau « Activité des enzymes de modification de l’ADN dans le CutSmart™ Buffer ».

Q : Mon enzyme n’a plus l’appellation Time-Saver™. Pourquoi ?
R : La définition de l’appellation Time-Saver™ englobait au départ toutes les enzymes de restriction capables de digérer l’ADN substrat rapidement (en 5-15 minutes). Nous avons récemment restreint la définition aux enzymes pouvant être incubées pendant la nuit en toute sécurité sans aucun effet négatif. Les enzymes qui ont perdu l’appellation Time-Saver digèrent toujours l’ADN en 5-15 minutes, mais ne peuvent pas être incubées toute une nuit ; elles sont généralement accompagnées d’une note explicative. La liste complète des enzymes qui digèrent l’ADN en 5-15 minutes et des enzymes Time-Saver est disponible sur www.neb-online.fr.

Q : Les digestions réalisées avec des enzymes Time-Saver™ doivent-elles impérativement durer 5-15 minutes ? Peuvent-elles être incubées plus longtemps ?
R : Les enzymes Time-Saver™ de NEB offrent l’avantage d’une digestion rapide (en 5-15 minutes), tout en résistant à une incubation d’une nuit.

Plus d’informations disponibles dans la section Ressources Techniques ou sur neb.com